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反相色谱是比较常用的色谱分离模式,占到了全部分析色谱的70%左右。通常只需优化流动相组成就可实现对大多数有机化合物和多肽的分离分析。反相硅胶色谱填料的制备方法比较简单,主要是通过硅胶表面---与带不同烷l基链或试剂键合。其中c4、c8和c18 硅胶键合相是使用比较广泛的反相色谱填料。反相色谱填料的研究是朝着柱效高、重现性好、分析速度快、制备方法简单、硅---掩蔽完全、选择性好、ph使用范围宽、---等目标进行。反相硅胶色谱填料发展主要是两方面:一方面是制备越来越丰富的键合相以满足hplc 越来越广的分离选择性的要求;另外一方面是解决反相色谱填料表面残留硅---带来拖尾、ph适用范围受限、及使用寿命短等问题。反相色谱填料制备的过程中, 由于位阻原因,硅胶表面的硅---不可能全部与试剂反应,残留的硅---在反相分离过程中会与极性分子形成非特---吸附,导致l极性化合物尤其是碱性化合---谱峰变宽,甚至---拖尾,柱效下降等。另外残留硅---还会影响硅胶色谱填料的耐酸碱性,并---其ph使用范围,缩短填料使用寿命。因此开发有效封尾(封端)技术以减少或消除残留硅---从而---反相色谱填料性能是色谱填料研究的重要方向之一。另外在封端过程中引进带正电荷的功能基团也可以屏蔽硅---对碱性化合物非特异吸附。
第二代球形硅胶色谱填料的粒径分布较宽,硅胶,而粒径分布是影响色谱填料性能的重要参数之一。在高l效液相色谱分离过程中,流动相流过的通路主要是粒状填料间的间隙,而填料形状、粒径大小及分布、都会影响填充柱床紧密程度的均一性,导致溶质分子在填充柱床中的流动路径和保留时间发生变化,从而影响分离效果。因此粒径分布均匀,形貌规整的球形填料填充柱床的紧密程度一致性好,流动相在柱床中的流速均匀,流动相经过柱床的路径长短一致,从而有效降低涡流扩散系数,使色谱峰宽变窄,理论塔板数升高。
用于色谱分离和分析的硅胶色谱填料性能要求高,---孔结构硅胶,需要控制其粒径大小、均匀性、形貌、孔径结构、比表面积、纯度及功能基团等众多参数,其中任何一个参数没有控制好,都会影响色谱分离性能。另外色谱填料的生产还要---批次的稳定性和重复性,uplc,即使性能再好的产品,如果无法---批次稳定性,也就无法使用,单分散球型硅胶,无法商业化。因此色谱填料的制备,尤其是批量生产技术壁垒高,难度大,全球只有少数几家公司包括瑞典的kromasil,日本daiso,fuji及agc具备---生产高l性能硅胶色谱填料基球的能力。分析型色谱柱及填料生产厂家比制备的多得多,主要有美国waters、agilent、 phenomenex、thermo、supelco和日本ymc、shodex,资l深堂等多家公司。
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